厭氧菌檢測(cè)儀的正常檢測(cè)范圍，就是它在什么條件下能給出準(zhǔn)數(shù)、不會(huì)報(bào)錯(cuò)。下面把實(shí)驗(yàn)室常用的三種檢測(cè)方式——氣體壓力法、熒光法和ATP生物發(fā)光法——分別說(shuō)明。
一、氣體壓力法
1.原理：把樣品放進(jìn)密封瓶，厭氧菌生長(zhǎng)消耗氧氣、產(chǎn)生CO?或H?，瓶?jī)?nèi)氣壓變化由傳感器記錄。
2.正常范圍：
瓶?jī)?nèi)初始氧氣≤0.1%，可用N?或CO?置換。
溫度35±1℃，低于30℃或高于40℃會(huì)延遲生長(zhǎng)。
接種量10?—10?CFU/mL；太少無(wú)信號(hào)，太多氣壓瞬間升高，軟件判為“異常”。
檢測(cè)時(shí)間一般24—72小時(shí)，超過(guò)96小時(shí)仍未變化視為陰性。
3.注意：瓶塞必須耐壓，漏氣會(huì)導(dǎo)致氣壓曲線平直，儀器報(bào)“無(wú)生長(zhǎng)”。
二、熒光法
1.原理：探針只在無(wú)氧環(huán)境下發(fā)光，氧濃度越高熒光越弱。
2.正常范圍：
氧濃度0—50 ppm，超過(guò)100 ppm熒光信號(hào)基線抬高，結(jié)果不可靠。
溫度25—37℃，溫差±2℃內(nèi)讀數(shù)變化＜5%。
樣品濁度＜100 NTU，太渾會(huì)吸光，出現(xiàn)假陰性。
pH 6.5—7.5，偏酸或偏堿都會(huì)讓探針猝滅。
3.日常校準(zhǔn)：用無(wú)氧水（加亞硫酸鈉）做零點(diǎn)，空氣飽和水做100%氧點(diǎn)，每?jī)芍芤淮巍?/div>
三、ATP生物發(fā)光法
1.原理：裂解厭氧菌后釋放ATP，與熒光素酶反應(yīng)產(chǎn)生光，光強(qiáng)和菌量成正比。
2.正常范圍：
菌量10²—10?CFU/mL；低于10²需濃縮，高于10?需稀釋，否則光強(qiáng)超出檢測(cè)器線性。
反應(yīng)溫度22—28℃，試劑盒內(nèi)酶對(duì)溫度敏感，超過(guò)30℃活性下降一半。
檢測(cè)時(shí)間10分鐘，延遲會(huì)導(dǎo)致ATP降解，數(shù)值偏低。
背景光＜100 RLU，實(shí)驗(yàn)室燈光或試管劃痕都會(huì)抬高背景，需在暗室操作。
四、干擾因素
1.殘留消毒劑：含氯或季銨鹽會(huì)抑制生長(zhǎng)，采樣前用無(wú)菌水或磷酸鹽緩沖液沖洗。
2.抗生素：若樣品來(lái)自治療中的病人，需加入β-內(nèi)酰胺酶或樹(shù)脂中和。
3.氣體比例：CO?濃度＞20%會(huì)抑制某些厭氧菌，需用混合氣（80%N?、10%H?、10%CO?）校準(zhǔn)。
五、質(zhì)控做法
每天做陽(yáng)性對(duì)照（已知厭氧菌株）和陰性對(duì)照（無(wú)菌培養(yǎng)基）。
陽(yáng)性應(yīng)在規(guī)定時(shí)間內(nèi)報(bào)警，陰性全程無(wú)信號(hào)，偏差＞±10%即停用并檢修。
氣體壓力法適合長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)，熒光法適合實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)無(wú)氧環(huán)境，ATP法適合快速計(jì)數(shù)。三種方法各有檢測(cè)上限和下限，只要控制溫度、氧氣、接種量和背景干擾，就能保證結(jié)果在正常范圍內(nèi)。
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